IMUNOMIKROBIOLOGICKÉ STUDIE

Imunologické metody se používají k řešení mnoha problémů:

1. Posouzení stavu imunitní systémčlověka (imunitní stav) stanovením kvantitativních a funkčních charakteristik buněk imunitního systému a jejich produktů.

2. Stanovení složení a vlastností lidských tkání: krevní skupiny, Rh faktor, transplantační antigeny.

3. Diagnostika infekčních onemocnění a rezistence vůči nim detekcí a stanovením titrů protilátek (sérodiagnostika), identifikací antigenů patogenů v těle a stanovením buněčných reakcí na tyto antigeny.

4. Seroidní identifikace kultur bakterií a virů izolovaných z těla lidí a zvířat.

5. Detekce v lidském těle a v vnější prostředí jakékoli látky s antigenními nebo haptenovými vlastnostmi (hormony, enzymy, jedy, léky, léky atd.).

6. Identifikace imunopatologických stavů, alergií, transplantačních a protinádorových reakcí.

Proces interakce mezi antigenem a protilátkou sérologické reakce probíhá ve dvou fázích:

1) charakteristický- fáze interakce, ve které dochází ke komplementární kombinaci aktivních center protilátek (paratopů) a epitopů antigenu. Tato fáze obvykle trvá několik sekund nebo minut;

2) nespecifické- fáze projevu, charakter vnější znaky tvorba imunitních komplexů. Tato fáze může trvat několik minut až několik hodin.

K optimální specifické interakci protilátek s antigenem dochází v izotonickém roztoku s pH blízkým neutrálnímu. Reakce antigen-protilátka v systému in vitro může být doprovázena výskytem několika jevů

· aglutinace,

· srážky,

· lýza.

Vnější projevy reakce závisí na fyzikální a chemické vlastnosti antigen (velikost částic, fyzikální stav), třída a typ protilátek (kompletní a neúplné), jakož i experimentální podmínky (konzistence média, koncentrace soli, pH, teplota).

Polyvalence antigenů a protilátek zajišťuje tvorbu agregátů viditelných pouhým okem. K tomu dochází v souladu s teorií tvorby sítě, podle níž jsou na výsledný komplex antigen-protilátka postupně připojeny další molekuly protilátky a antigenu. V důsledku toho se tvoří síťové struktury, které se mění v agregáty, které se vysrážejí. Povaha a závažnost reakce závisí na kvantitativním poměru antigenů a protilátek. Nejintenzivnější reakce nastanou, když jsou reagencie v ekvivalentních poměrech.

Předpoklad tvorba mřížky (sítě) - přítomnost více než tří antigenních determinant pro každou molekulu antigenu a dvě aktivní centrum pro každou molekulu protilátky. Molekuly antigenu jsou uzly mřížky a molekuly protilátek jsou spojovací články. Oblast optimálních poměrů (zóna ekvivalence) koncentrací antigenu a protilátek, kdy po vytvoření sedimentu nejsou v supernatantu detekovány volné antigeny ani volné protilátky.

Agregáty, které se mohou vysrážet, se tvoří, když se antigeny spojí s plnými protilátkami. Nekompletní protilátky (monovalentní) nezpůsobují tvorbu síťových struktur a velkých agregátů. K detekci takových protilátek se používají speciální metody založené na použití antiglobulinů (Coombsova reakce).

Sérologické testy se pro svou vysokou specificitu a senzitivitu používají k detekci a kvantifikace antigeny a protilátky. Množství imunoreagentů v reakcích je vyjádřeno titrem - maximálním ředěním séra nebo antigenu, při kterém je ještě pozorována reakce.

Sérologické reakce v mikrobiologických a imunologických laboratořích se používají ke dvěma účelům:

1) pro séroidentifikaci mikroorganismů, toxinů, antigenů obecně pomocí známé protilátky (imunitní diagnostické sérum),

2) pro sérodiagnostiku - stanovení povahy protilátky v krevním séru pacienta na bakteriální, virové a méně často jiné infekční choroby pomocí známého antigenu (diagnosticum).

K určení generika, druhu a typu antigenu jsou zapotřebí známá imunodiagnostická séra. Získávají se opakovaným podáváním zvířatům (nejčastěji králíkům) ve zvyšujících se dávkách usmrcených nebo živých mikroorganismů, produktů jejich rozkladu, neutralizovaných nebo nativních toxinů. Po určitém cyklu imunizace zvířat se provádí masivní prokrvení nebo celkové vykrvení zvířete. Krev odebraná do sterilní nádoby se nejprve umístí do termostatu při teplotě 37°C na 4 - 6 hodin pro urychlení srážení, poté na jeden den do lednice. Vzniklé průhledné sérum se odsaje do sterilní nádobky, přidají se konzervační látky, stanoví se titr protilátek, zkontroluje se sterilita a nalije se do ampulí.

Jsou používány neadsorbovaný A adsorbované diagnostická séra. Neadsorbovaná séra mají vysoké titry protilátek, ale jsou schopna vyvolat skupinové (křížové) reakce.

Adsorbovaná séra se vyznačují přísnou specificitou účinku (reagují pouze s homologním antigenem). Nazývají se séra obsahující protilátky pouze proti jednomu specifickému antigenu monoreceptor.

Produkují také séra značená fluorochromy, enzymy a radioizotopy, které umožňují vysoký stupeň přesně detekovat i stopy antigenu.

Suspenze živých nebo usmrcených bakterií, produktů jejich rozpadu, toxinů a virů se používají jako antigeny (diagnostika) v sérologických reakcích. V některých případech se používají extrakty nebo chemicky izolované antigeny z mikroorganismů a živočišných tkání.

Všechny imunomikrobiologické metody lze rozdělit do 3 skupin:

1) na základě přímá interakce antigenu s protilátkou(jevy aglutinace, precipitace, hemaglutinace, imobilizace atd.);

2) na základě zprostředkovaná interakce antigenu s protilátkou(reakce nepřímá hemaglutinace koagulace, latexová aglutinace, uhlíková aglomerace, bentonitová aglutinace, fixace komplementu atd.);

3) pomocí značené protilátky nebo antigeny(metoda fluorescenčních protilátek, enzymatické imunoanalýzy a radioimunoanalýzy a další metody).

AGLUTINAČNÍ REAKCE

Tyto reakce zahrnují antigeny ve formě částic (mikrobiálních buněk, červených krvinek a dalších korpuskulárních antigenů), které jsou slepeny dohromady protilátkami a vysrážejí se.

K provedení aglutinační reakce(RA) jsou zapotřebí tři složky: 1) antigen (aglutinogen);

2) protilátka (aglutinin)

3) elektrolyt (izotonický roztok chloridu sodného).

Přibližná aglutinační reakce (RA)

Indikativní nebo destička RA se umístí na podložní sklíčko při pokojové teplotě. K tomu použijte Pasteurovu pipetu a naneste odděleně na sklenici kapku séra v ředění 1:10 až 1:20 a kontrolní kapku izotonického roztoku chloridu sodného. Do obou bakteriologických smyček se zavedou kolonie nebo denní kultura bakterií (kapka diagnostica) a důkladně se promísí. Reakce jsou zohledněny vizuálně po několika minutách, někdy pomocí lupy (x5). Při pozitivní RA je v kapce séra zaznamenán výskyt velkých a malých vloček, při negativní RA zůstává sérum rovnoměrně zakalené.

Detailní aglutinační reakce za účelem identifikace titru specifických protilátek u pacienta.

Plně rozvinutá RA pro sérodiagnostiku se provádí v séru pacientů. Také se ředí v izotonickém roztoku chloridu sodného od 1:50 - 1:100 do 1:800 nebo 1:1600. Protože nižší sérové ​​titry mohou obsahovat normální aglutininy nalezené v zdravých lidí nebo pacientů s jinou diagnózou (diagnostický titr). Jako antigen v této reakci se používají diagnostická - známé suspenze, obvykle usmrcených bakterií.

Do aglutinačních zkumavek se nejprve nalije 1 ml izotonického roztoku chloridu sodného. Do prvního z nich se přidá 1 ml séra zředěného 1:100 a po jeho promíchání se 1 ml přenese do druhého, z druhého na třetí atd. K výsledným dvojnásobným ředěním sér (od 1:100 do 1:1600 nebo více) se přidají 1-2 kapky bakteriální suspenze obsahující 3 miliardy mikrobiálních tělísek v 1 ml. Zkumavky se protřepou a umístí na 2 hodiny do termostatu při 37 °C, poté se udržují při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.

Podrobná aglutinační reakce se zohledňuje postupným vyhodnocením každé zkumavky, počínaje kontrolními, za mírného protřepání. V kontrolních zkumavkách by neměla být žádná aglutinace. Intenzita aglutinační reakce je označena následujícími znaky: ++++ - úplná aglutinace (aglutinace vloček v absolutně průhledné kapalině); +++ - neúplná aglutinace (vločky v mírně opalescentní kapalině); ++ - částečná aglutinace (vločky jsou jasně viditelné, kapalina je mírně zakalená); + - slabá, pochybná aglutinace - kapalina je velmi zakalená, vločky v ní jsou těžko rozlišitelné; - - absence aglutinace (kapalina je rovnoměrně zakalená).

Za titr séra se považuje jeho poslední ředění, ve kterém je intenzita aglutinace hodnocena jako ne méně než dva plusy (++)

v mikrobiologii

"Aglutinační reakce a její typy (RA)"

Plán:

1. Úvod………………………………………………………………………………………..3

2. RA na skle………………………………………………………………………………..4

3. Zkumavka RA……………………………………………………………………………………………….5

4. Použitá literatura………………………………………………………………………..7

1. Úvod.

Interakce mikrobiálního antigenu a protilátek je přísně specifické povahy a je zaměřena v těle zvířete na neutralizaci patogenu a jeho toxinů. Interakce antigenu a protilátek in vitro je za určitých podmínek provázena viditelnými jevy (aglutinace, precipitace, imunitní lýza), což umožňuje využití AG-AT reakcí, nazývaných sérologické (z latinského sérum), pro praktické účely. Biotovárny produkují antigeny a imunitní séra (protilátky) známé specifické povahy (diagnostické). Pomocí takových sér v sérologických reakcích je možné identifikovat neznámý mikroorganismus nebo pomocí známého antigenu detekovat v těle protilátky syntetizované v reakci na zavlečení patogenu, a tak stanovit diagnózu (sérologickou diagnózu). Kromě toho lze sérologické reakce použít k posouzení intenzity imunitní odpovědi po očkování nebo infekčním onemocnění.

Aglutinační reakce, jako je nepřímá aglutinace a Coombs, jsou založeny na in vitro interakci korpuskulárních antigenů s protilátkami a schopnosti výsledných komplexů precipitovat. Jako korpuskulární antigeny se používají bakteriální buňky nebo rozpustné antigeny extrahované z mikroorganismů a sorbované na nosných tělíscích: červené krvinky, latexové částice atd.

Antigenní determinanty korpuskulárních antigenů specificky interagují s homologními protilátkami (specifická, neviditelná fáze reakce), a pak komplexy antigen-protilátka tvoří velké konglomeráty viditelné pouhým okem, které se vysrážejí - aglutinát (nespecifická, viditelná fáze reakce). ). Formy mikrobů bez bičíkatých (Brucellae) produkují granulované aglutinanty, zatímco bičíkaté formy (Escherichia, Salmonella) produkují velké bavlněné aglutinanty, které se usazují na dně zkumavky ve formě obráceného deštníku a při zatřesení se snadno rozbijí. Antigeny a protilátky interagují pouze v přítomnosti elektrolytu (0,8% roztok chloridu sodného). Průběh reakce je ovlivněn koncentrací soli v elektrolytu, počtem mikrobiálních buněk v suspenzi, koncentrací v séru, pH, teplotou a dalšími faktory.

Aglutinační reakce (ra).

Dochází ke specifické aglutinaci, která je založena na interakci antigenu S homologní protilátka , obsažené v těle zvířete, do kterého byl tento antigen zaveden (imunoaglutinace); nespecifické (chemické), vznikající změnami pH prostředí, koncentrací elektrolytů; spontánní, což je pozorováno, když jsou bakterie (v R-formě) suspendovány ve fyziologickém roztoku a při zahřívání, což je spojeno se změnou koloidního stavu bakteriální buňky. Antigen , zapojený do RA se nazývá aglutinogen, protilátka se nazývá aglutinin a výsledná sraženina se nazývá aglutinát. Při tvorbě aglutinátu je důležitý kvantitativní poměr antigenu a protilátek (optimální jev). Při přebytku nebo nedostatku protilátek dochází ke zpoždění.

Aglutinační reakce (RA) je jednou z prvních imunologických reakcí používaných v mikrobiologické praxi. Poprvé (1895) použil F. Vidal RA k diagnostice břišního tyfu. Později (1897) použil A. Wright stejnou reakci k diagnostice brucelózy u lidí. RA také našla uplatnění v diagnostice pullorózy u kuřat, leptospirózy, infekčního potratu klisen a také při typizaci neznámých mikrobiálních kultur pomocí známého aglutinačního séra. RA je vysoce citlivá; lze jím detekovat 0,01 μg protilátkového proteinového dusíku v 1 ml.

Bylo vyvinuto několik variant aglutinační reakce, které se liší metodologickým provedením a účelem studie.

2. Ra na skle.

U této varianty RA mohou být testovanými subjekty buď sérum nebo antigen, ale nejčastěji se tato možnost používá k identifikaci mikroorganismů.

1. K identifikaci mikroorganismu (m/o) se kapka známého aglutinačního séra, například séra Salmonella, a kapka fyziologického roztoku (kontrola) aplikují odděleně na podložní sklíčko bez tuku. Poté se pomocí bakteriologické smyčky odebere bakteriální hmota studované kultury z kolonie v Petriho misce nebo z povrchu šikmé MPA ve zkumavce a odděleně se suspenduje v imunitním séru a fyziologickém roztoku, dokud se nezíská homogenní suspenze. . Výsledek se bere v úvahu po 2...4 minutách.

Zaúčtování výsledků: v kontrolním vzorku by neměly být žádné změny. Pokud se bakteriální kultura specificky shoduje s imunitním sérem, objeví se aglutinační vločky (pozitivní výsledek), pokud nedochází k aglutinačnímu jevu, dochází k závěru, že studovaná bakteriální kultura neodpovídá imunitnímu séru.

2. Uvažujme detekci anittelů v testovacím krevním séru na příkladu testu bengálské růže používaného v sérodiagnostice brucelózy. Na podložní sklíčko se nanese 0,3 ml krevního séra testovaného zvířete a 0,03 ml brucelózního antigenu (buňky brucelly obarvené růžovou barvou). Složky se důkladně promíchají protřepáním sklenice a výsledek se vezme v úvahu po 4 minutách.

Záznam výsledků: pokud je reakce pozitivní, objeví se růžové vločky aglutinátu. Sérologická reakce tohoto typu je klasifikována jako kvalitativní, protože může být použita k detekci protilátek proti patogenu v krevním séru zvířete, ale není možné posoudit jejich kvantitativní obsah.

Aglutinační reakce (z lat. aglutinatio- lepení) - lepení tělísek (bakterií, červených krvinek atd.) protilátkami za přítomnosti elektrolytů.

Aglutinační reakce se projevuje ve formě vloček nebo sedimentu složených z tělísek (např. bakterií) „slepených“ protilátkami (obr. 7.37). Aglutinační reakce se používá k: stanovení patogenu izolovaného z pacienta; stanovení protilátek v krevním séru pacienta; stanovení krevních skupin.

Rýže. 7,37 a, b. Aglutinační reakce sIgM-protilátky (a) aIgG- protilátky (b)

1. Stanovení patogenu izolovaného od pacienta Přibližná aglutinační reakce na skle (obr. 7.38). Suspenze bakterií izolovaných z pacienta se přidá ke kapce aglutinačního séra (ředění 1:20). Vytvoří se vločkovitá sraženina.

Rýže. 7.38.

Rozsáhlá aglutinační reakce s patogenem izolovaným z pacienta (obr. 7.39). Suspenze bakterií izolovaných z pacienta se přidá k ředěním aglutinačního séra.

Rýže. 52

2. Stanovení protilátek v krevním séru pacienta
Detailní aglutinační reakce s krevním sérem pacienta (obr. 7.39). Diagnosticum se přidává do ředění pacientova séra.
- Aglutinace pomocí O-diagnosticum (bakterie usmrcená teplem, zadržující O-antigen) probíhá ve formě jemnozrnné aglutinace.
- Aglutinace pomocí H-diagnosticum (bakterie usmrcené formaldehydem, zadržující bičíkový H-antigen) je velká a probíhá rychleji.
3. Aglutinační reakce pro stanovení krevních skupin Aglutinační reakce ke stanovení krevních skupin slouží k založení ABO systému (tab. b) pomocí aglutinace erytrocytů imunitními sérovými protilátkami proti antigenům krevních skupin A (I), B (III). Kontrolou je: sérum, které neobsahuje protilátky, tzn. krevní skupina AB (IV) v séru; antigeny obsažené v červených krvinkách skupin A (II), B (III). Negativní kontrola neobsahuje antigeny, tj. jsou použity erytrocyty skupiny O (I).

Tabulka 7.6. Stanovení krevních skupin ABO

Výsledky reakce		Skupina
		patřící
		zkoumal krev
červené krvinky s	sérum (plazma)
Standard	se standardem
séra

Obsah tématu "Imunomodulátory. Imunodiagnostika infekčních onemocnění.":

Detailní aglutinační reakce (RA). Ke stanovení AT v krevním séru pacienta a rozsáhlá aglutinační reakce (RA). K tomu se do řady ředění krevního séra přidává diagnostikum - suspenze usmrcených mikroorganismů nebo částic se sorbovaným Ag. Poskytování maximálního ředění aglutinace Ag se nazývá sérový titr.

Typy aglutinačních reakcí (RA) k průkazu AT - kapkový test na tularémii (s diagnostikem aplikovaným na kapku krve a výskytem viditelných bělavých aglutinátů) a Huddlesonův test na brucelózu (s diagnostickým testem obarveným genciánovou violetí aplikovaným na kapku krve sérum).

Přibližná aglutinační reakce (RA)

K identifikaci izolovaných mikroorganismů se na podložní sklíčka umístí přibližná RA. K tomu se ke kapce standardního diagnostického antiséra (ředěného 1:10, 1:20) přidá kultura patogenu. Na pozitivní výsledek proveďte podrobnou reakci se zvyšujícím se ředěním antiséra.

Reakce za pozitivní, pokud je aglutinace pozorována v ředěních blízkých titru diagnostického séra.

OAS. Somatické O-Ags jsou tepelně stabilní a snesou var 2 hod. Při interakci s AT tvoří jemnozrnné agregáty.

Kobylka. N-Ag (bičíkaté) jsou termolabilní a rychle se rozkládají při 100 °C i vlivem etanolu. Při reakcích s H-antisérem se po 2 hodinách inkubace tvoří volné velké vločky (tvořené slepením bakterií s bičíky).

Vi-Ar tyfus je relativně tepelně stabilní (odolává teplotám 60-62 °C po dobu 2 hodin); Při inkubaci s Vi antisérem se vytvoří jemnozrnný aglutinát.

Přímé hemaglutinační reakce

Nejjednodušší z nich reakce - aglutinacečervené krvinky neboli hemaglutinace, používané k určení krevních skupin v systému ABO. Pro určení aglutinace(nebo jejich nedostatek) použijte standardní antiséra s anti-A a anti-B aglutininy. Reakce se nazývá přímá, protože zkoumané Ag jsou přirozené složky červených krvinek.

Společné s přímou hemaglutinaci virová hemaglutinace má mechanismy. Řada virů je schopna spontánně aglutinovat erytrocyty ptáků a savců, jejich přidání do suspenze erytrocytů z nich způsobuje tvorbu agregátů.

Aglutinace je slepení a vysrážení mikrobů nebo jiných buněk vlivem protilátek v přítomnosti elektrolytu (izotonický roztok chloridu sodného). Skupiny slepených bakterií (buněk) se nazývají aglutináty. Pro aglutinační reakci jsou zapotřebí následující složky:

1. Protilátky (aglutininy), které se nacházejí v séru nemocného nebo imunního zvířete.

2. Antigen – suspenze živých nebo usmrcených mikrobů, červených krvinek nebo jiných buněk.

3. Izotonický (0,9%) roztok chloridu sodného.

Aglutinační reakce pro sérodiagnostiku se používá u břišního tyfu a paratyfu (Vidalova reakce), brucelózy (Wrightova a Heddlesonova reakce), tularémie atd. Protilátka je pacientovo sérum a antigen je známý mikrob. Při identifikaci mikrobů nebo jiných buněk se jako antigen používá jejich suspenze a jako protilátka známé imunitní sérum. Tato reakce je široce používána pro diagnostiku střevní infekce, černý kašel atd.

Metody stagingu RA

Přibližná RA na skle

Nasazený RA

(objemová metoda)

Koaglutinační reakce

Rozložená RA na skle (seroidentifikace)

Aglutinační reakce na skle. Na podložní sklíčko bez tuku se aplikují dvě kapky specifického (adsorbovaného) séra a kapka izotonického roztoku chloridu sodného. Neadsorbovaná séra jsou předředěna v poměru 1:5 - 1:100. Kapky musí být aplikovány na sklo tak, aby mezi nimi byla vzdálenost. Kultura se důkladně rozemele na skle pomocí kličky nebo pipety a poté se přidá ke kapce izotonického roztoku chloridu sodného a jedné z kapek séra, přičemž se každá z nich míchá, dokud se nevytvoří homogenní suspenze. Kapka séra bez kultury je kontrola séra.

Pozornost! Kulturu ze séra nemůžete přenést do kapky izotonického roztoku chloridu sodného, ​​který slouží jako kontrola antigenu. Reakce probíhá při teplotě místnosti po dobu 1-3 minut. Pokud kontrola séra zůstane průhledná, u antigenové kontroly je pozorován stejnoměrný zákal a v kapce, kde se kultura smíchá se sérem na pozadí čiré kapaliny, se objeví aglutinační vločky, je výsledek reakce považován za pozitivní.

Diagnostické Fyziologické

sérum + kultivační roztok + kultura

Detailní aglutinační reakce (objemová metoda). Připravují se sériová, nejčastěji dvojnásobná, ředění séra. Metoda se nazývá volumetrická. Pro stanovení titru protilátek v krevním séru vezměte 6 zkumavek. Do první zkumavky nalijte 1 ml původního ředění séra 1:50 a pomocí odměrné pipety přidejte 1 ml fyziologického roztoku do všech 6 zkumavek. První zkumavka poskytne ředění séra 1:100 o objemu 2 ml. Přeneste 1 ml z první zkumavky do druhé zkumavky, kde je ředění 1:200. Proveďte tedy sérii sériových ředění séra v prvních 5 zkumavkách (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Z páté zkumavky nalijte 1 ml do dezinfekčního roztoku. Přidejte 2 kapky diagnostica do všech 6 zkumavek. Šestá zkumavka je kultivační kontrola, protože obsahuje pouze fyziologický roztok a diagnostikum.

Ingredience	číslo trubky
						kontrola séra	řízení diagnostická kuma
Fyziologický
Sérum pacienta
ředění 1:50
Diagnosticum (kapky)
Ředění séra

Taková kontrola je nezbytná k vyloučení spontánní aglutinace kultury. Zkumavky se protřepou a umístí na 2 hodiny do termostatu při teplotě 37 °C a poté se nechají jeden den při teplotě místnosti, načež se zaznamenají výsledky aglutinační reakce. Při provádění aglutinační reakce se séry dětí v prvních měsících života je z důvodu funkční méněcennosti tvorby protilátek nutné identifikovat nižší titry protilátek, což je zohledněno při ředění séra. Počáteční ředění séra je 1:25. V první zkumavce se získá ředění 1:50, poté 1:100 atd.

Pokud je výsledek reakce pozitivní, zkumavky ukazují uvízlé buňky ve formě zrnek nebo vloček na pozadí čiré kapaliny. Aglutinát se postupně usadí na dně ve formě „deštníku“ a kapalina nad sedimentem se vyjasní. Antigenová kontrola je rovnoměrně zakalená.

Podle charakteru sedimentu se rozlišuje jemnozrnná a hrubozrnná (vločková) aglutinace. Při práci s O-sérami se dosáhne jemnozrnné aglutinace. Hrubozrnný - když pohybliví mikrobi interagují s bičíkovými H-séry. Vzniká rychleji než jemnozrnný a vzniklý sediment je velmi sypký a snadno se rozbije.

Intenzita reakce je vyjádřena takto:

Všechny buňky se usadily, kapalina ve zkumavce je zcela průhledná. Výsledek reakce je ostře pozitivní;

Usazenin je méně, kapalina se úplně nevyčistí. Výsledek reakce je pozitivní;

Usazenin je ještě méně, kapalina je kalnější. Výsledek reakce je pochybný;

Na dně zkumavky je mírný sediment, kapalina je zakalená. Pochybný výsledek reakce;

Není zde žádný sediment, kapalina je rovnoměrně zakalená, jako u kontroly antigenu. Výsledek negativní reakce