IMUNOMIKROBIOLOGICKÉ ŠTÚDIE

Imunologické metódy sa používajú na riešenie mnohých problémov:

1. Posúdenie stavu imunitný systémčloveka (imunitný stav) stanovením kvantitatívnych a funkčných charakteristík buniek imunitného systému a ich produktov.

2. Stanovenie zloženia a charakteristík ľudských tkanív: krvné skupiny, Rh faktor, transplantačné antigény.

3. Diagnostika infekčných chorôb a rezistencie na ne detekciou a stanovením titrov protilátok (sérodiagnostika), identifikáciou antigénov patogénov v tele a stanovením bunkových reakcií na tieto antigény.

4. Séroidná identifikácia kultúr baktérií a vírusov izolovaných z tela ľudí a zvierat.

5. Detekcia v ľudskom tele a v vonkajšie prostredie akékoľvek látky s antigénnymi alebo hapténovými vlastnosťami (hormóny, enzýmy, jedy, lieky, lieky atď.).

6. Identifikácia imunopatologických stavov, alergií, transplantácií a protinádorových reakcií.

Proces interakcie medzi antigénom a protilátkou sérologické reakcie prebieha v dvoch fázach:

1) špecifické- fáza interakcie, v ktorej dochádza ku komplementárnej kombinácii aktívnych centier protilátok (paratopov) a antigénnych epitopov. Typicky táto fáza trvá niekoľko sekúnd alebo minút;

2) nešpecifické- fáza prejavu, charakter vonkajšie znaky tvorba imunitných komplexov. Táto fáza môže trvať niekoľko minút až niekoľko hodín.

Optimálna špecifická interakcia protilátok s antigénom nastáva v izotonickom roztoku s pH blízkym neutrálnemu. Reakciu antigén-protilátka v systéme in vitro môže sprevádzať výskyt niekoľkých javov

· aglutinácia,

· zrážky,

· lýza.

Vonkajšie prejavy reakcie závisia od fyzikálne a chemické vlastnosti antigén (veľkosť častíc, fyzikálny stav), trieda a typ protilátok (úplné a neúplné), ako aj experimentálne podmienky (konzistencia média, koncentrácia soli, pH, teplota).

Polyvalencia antigénov a protilátok zabezpečuje tvorbu agregátov viditeľných voľným okom. K tomu dochádza v súlade s teóriou tvorby siete, podľa ktorej sa na výsledný komplex antigén-protilátka postupne pripájajú ďalšie molekuly protilátky a antigénu. V dôsledku toho sa vytvárajú sieťové štruktúry, ktoré sa menia na agregáty, ktoré sa zrážajú. Povaha a závažnosť reakcie závisí od kvantitatívneho pomeru antigénov a protilátok. Najintenzívnejšie reakcie sa vyskytujú, keď sú činidlá v rovnakých pomeroch.

Predpoklad tvorba mriežky (sietí) - prítomnosť viac ako troch antigénnych determinantov pre každú molekulu antigénu a dvoch aktívne centrum pre každú molekulu protilátky. Molekuly antigénu sú mriežkové uzly a molekuly protilátok sú spojovacie články. Oblasť optimálnych pomerov (zóna ekvivalencie) koncentrácií antigénu a protilátky, keď po vytvorení sedimentu nie sú v supernatante detegované ani voľné antigény, ani voľné protilátky.

Agregáty, ktoré sa môžu vyzrážať, sa tvoria, keď sa antigény kombinujú s úplnými protilátkami. Nekompletné protilátky (monovalentné) nespôsobujú tvorbu sieťových štruktúr a veľkých agregátov. Na detekciu takýchto protilátok sa používajú špeciálne metódy založené na použití antiglobulínov (Coombsova reakcia).

Sérologické testy sa pre svoju vysokú špecificitu a senzitivitu používajú na detekciu a kvantifikácia antigény a protilátky. Množstvo imunoreagentov v reakciách je vyjadrené titrom - maximálnym zriedením séra alebo antigénu, pri ktorom je ešte pozorovaná reakcia.

Sérologické reakcie v mikrobiologických a imunologických laboratóriách sa používajú na dva účely:

1) na séroidentifikáciu mikroorganizmov, toxínov, antigénov všeobecne pomocou známej protilátky (imunitné diagnostické sérum),

2) na sérodiagnostiku - určenie povahy protilátky v krvnom sére pacienta na bakteriálne, vírusové a menej často iné infekčné choroby pomocou známeho antigénu (diagnostika).

Na určenie generika, druhu a typu antigénu sú potrebné známe imunodiagnostické séra. Získavajú sa opakovaným podávaním zvieratám (zvyčajne králikom) vo zvyšujúcich sa dávkach usmrtených alebo živých mikroorganizmov, produktov ich rozkladu, neutralizovaných alebo natívnych toxínov. Po určitom cykle imunizácie zvierat sa vykonáva masívne prekrvenie alebo celkové vykrvenie zvieraťa. Krv odobratá do sterilnej nádoby sa najskôr umiestni do termostatu pri teplote 37 °C na 4 - 6 hodín, aby sa urýchlila zrážanlivosť, a potom sa na jeden deň do mrazničky. Výsledné priehľadné sérum sa odsaje do sterilnej nádobky, pridajú sa konzervačné látky, stanoví sa titer protilátok, skontroluje sa sterilita a naleje sa do ampuliek.

Používajú sa neadsorbované A adsorbované diagnostické séra. Neadsorbované séra majú vysoké titre protilátok, ale sú schopné vyvolať skupinové (krížové) reakcie.

Adsorbované séra sa vyznačujú prísnou špecifickosťou účinku (reagujú len s homológnym antigénom). Séra obsahujúce protilátky len proti jednému špecifickému antigénu sa nazývajú monoreceptor.

Vyrábajú tiež séra značené fluorochrómmi, enzýmami a rádioizotopmi, ktoré umožňujú vysoký stupeň presne detekovať aj stopy antigénu.

Suspenzie živých alebo usmrtených baktérií, produktov ich rozpadu, toxínov a vírusov sa používajú ako antigény (diagnostika) v sérologických reakciách. V niektorých prípadoch sa používajú extrakty alebo chemicky izolované antigény z mikroorganizmov a živočíšnych tkanív.

Všetky imunomikrobiologické metódy možno rozdeliť do 3 skupín:

1) na základe priama interakcia antigénu s protilátkou(javy aglutinácie, precipitácie, hemaglutinácie, imobilizácie atď.);

2) na základe sprostredkovaná interakcia antigénu s protilátkou(reakcie nepriama hemaglutinácia koagulácia, latexová aglutinácia, uhlíková aglomerácia, bentonitová aglutinácia, fixácia komplementu atď.);

3) pomocou značené protilátky alebo antigény(metóda fluorescenčnej protilátky, enzýmovo viazaný imunosorbent a rádioimunoanalýza a iné metódy).

AGLUTINAČNÉ REAKCIE

Tieto reakcie zahŕňajú antigény vo forme častíc (mikrobiálnych buniek, červených krviniek a iných korpuskulárnych antigénov), ktoré sú navzájom zlepené protilátkami a precipitujú.

Na vykonanie aglutinačnej reakcie(RA) sú potrebné tri zložky: 1) antigén (aglutinogén);

2) protilátka (aglutinín)

3) elektrolyt (izotonický roztok chloridu sodného).

Približná aglutinačná reakcia (RA)

Indikatívna alebo doštička RA sa umiestni na sklíčko pri teplote miestnosti. Na tento účel použite Pasteurovu pipetu na nanesenie kvapky séra v riedení 1:10 až 1:20 a kontrolnej kvapky izotonického roztoku chloridu sodného oddelene na sklo. Kolónie alebo denná kultúra baktérií (kvapka diagnostica) sa zavedú do oboch bakteriologických slučiek a dôkladne sa premiešajú. Reakcie sa vizuálne zohľadnia po niekoľkých minútach, niekedy pomocou lupy (x5). Pri pozitívnej RA sa v kvapke séra zaznamená výskyt veľkých a malých vločiek, pri negatívnej RA zostáva sérum rovnomerne zakalené.

Podrobná aglutinačná reakcia s cieľom identifikovať titer špecifických protilátok u pacienta.

Plne rozvinutá RA na sérodiagnostiku sa robí v sére pacientov. Tiež sa riedi v izotonickom roztoku chloridu sodného od 1:50 – 1:100 do 1:800 alebo 1:1600. Keďže nižšie sérové ​​titre môžu obsahovať normálne aglutiníny nachádzajúce sa v zdravých ľudí alebo pacientov s inou diagnózou (diagnostický titer). Ako antigén v tejto reakcii sa používajú diagnostické prostriedky - známe suspenzie, zvyčajne usmrtených baktérií.

1 ml izotonického roztoku chloridu sodného sa najskôr naleje do aglutinačných skúmaviek. Do prvej z nich sa pridá 1 ml séra zriedeného 1:100 a po premiešaní sa 1 ml prenesie do druhej, z druhej do tretej atď. Do výsledného dvojnásobného riedenia séra (od 1:100 do 1:1600 alebo viac) sa pridajú 1-2 kvapky bakteriálnej suspenzie obsahujúcej 3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml. Skúmavky sa pretrepávajú a umiestnia sa do termostatu pri 37 °C na 2 hodiny, potom sa udržiavajú pri teplote miestnosti 24 hodín.

Podrobná aglutinačná reakcia sa berie do úvahy pri postupnom hodnotení každej skúmavky, počnúc kontrolnými, s jemným pretrepaním. V kontrolných skúmavkách by nemala byť žiadna aglutinácia. Intenzita aglutinačnej reakcie je označená nasledujúcimi znakmi: ++++ - úplná aglutinácia (aglutinácia vločiek v absolútne priehľadnej kvapaline); +++ - neúplná aglutinácia (vločky v mierne opaleskujúcej kvapaline); ++ - čiastočná aglutinácia (vločky sú jasne viditeľné, kvapalina je mierne zakalená); + - slabá, pochybná aglutinácia - kvapalina je veľmi zakalená, vločky v nej sú ťažko rozlíšiteľné; - - absencia aglutinácie (kvapalina je rovnomerne zakalená).

Za titer séra sa považuje jeho posledné riedenie, pri ktorom sa intenzita aglutinácie hodnotí ako najmenej dva plusy (++)

v mikrobiológii

"Aglutinačná reakcia a jej typy (RA)"

Plán:

1. Úvod………………………………………………………………………………………..3

2. RA na skle……………………………………………………………………………….4

3. Skúmavka RA……………………………………………………………………………………………….5

4. Použitá literatúra………………………………………………………………………..7

1. Úvod.

Interakcia mikrobiálneho antigénu a protilátok je prísne špecifická a je zameraná v tele zvieraťa na neutralizáciu patogénu a jeho toxínov. Interakciu antigénu a protilátok in vitro za určitých podmienok sprevádzajú viditeľné javy (aglutinácia, precipitácia, imunitná lýza), čo umožňuje využitie AG-AT reakcií, nazývaných sérologické (z lat. sérum), na praktické účely. Biofabriky produkujú antigény a imunitné séra (protilátky) známej špecifickej povahy (diagnostické). Použitím takýchto sér v sérologických reakciách je možné identifikovať neznámy mikroorganizmus alebo pomocou známeho antigénu detegovať v tele protilátky syntetizované v reakcii na zavlečenie patogénu, a tak stanoviť diagnózu (sérologickú diagnózu). Okrem toho sa sérologické reakcie môžu použiť na posúdenie intenzity imunitnej odpovede po očkovaní alebo infekčnom ochorení.

Aglutinačné reakcie, ako je nepriama aglutinácia a Coombs, sú založené na in vitro interakcii korpuskulárnych antigénov s protilátkami a na schopnosti výsledných komplexov precipitovať. Ako korpuskulárne antigény sa používajú bakteriálne bunky alebo rozpustné antigény extrahované z mikroorganizmov a sorbované na nosných telieskach: červené krvinky, latexové častice atď.

Antigénne determinanty korpuskulárnych antigénov špecificky interagujú s homológnymi protilátkami (špecifická, neviditeľná fáza reakcie), a potom komplexy antigén-protilátka vytvárajú veľké konglomeráty viditeľné voľným okom, ktoré sa vyzrážajú – aglutinát (nešpecifická, viditeľná fáza reakcie). ). Formy mikróbov bez bičíkovcov (Brucellae) produkujú granulované aglutinanty, zatiaľ čo bičíkovité formy (Escherichia, Salmonella) produkujú veľké bavlnené aglutinanty, ktoré sa usadzujú na dne skúmavky vo forme obráteného dáždnika a pri zatrasení sa ľahko rozbijú. Antigény a protilátky interagujú iba v prítomnosti elektrolytu (0,8 % roztok chloridu sodného). Priebeh reakcie je ovplyvnený koncentráciou soli v elektrolyte, počtom mikrobiálnych buniek v suspenzii, koncentráciou v sére, pH, teplotou a ďalšími faktormi.

Aglutinačná reakcia (ra).

Existuje špecifická aglutinácia, ktorá je založená na interakcii antigénu s homológna protilátka , obsiahnuté v tele zvieraťa, do ktorého bol tento antigén zavedený (imunoaglutinácia); nešpecifické (chemické), vznikajúce pri zmenách pH prostredia, koncentrácie elektrolytov; spontánne, čo sa pozoruje pri suspendovaní baktérií (v R-forme) vo fyziologickom roztoku a pri zahrievaní, čo je spojené so zmenou koloidného stavu bakteriálnej bunky. Antigén , zapojený do RA sa nazýva aglutinogén, protilátka sa nazýva aglutinín a výsledná zrazenina sa nazýva aglutinát. Pri tvorbe aglutinátu je dôležitý kvantitatívny pomer antigénu a protilátok (optimálny jav). Pri nadbytku alebo nedostatku protilátok dochádza k oneskoreniu.

Aglutinačná reakcia (RA) je jednou z prvých imunologických reakcií používaných v mikrobiologickej praxi. Prvýkrát (1895) F. Vidal použil RA na diagnostiku brušného týfusu. Neskôr (1897) použil A. Wright rovnakú reakciu na diagnostiku brucelózy u ľudí. RA našla uplatnenie aj pri diagnostike pullorózy u kurčiat, leptospirózy, infekčného potratu kobýl, ako aj pri typizácii neznámych mikrobiálnych kultúr pomocou známeho aglutinačného séra. RA je vysoko citlivá; môže byť použitý na detekciu 0,01 μg protilátkového proteínového dusíka v 1 ml.

Bolo vyvinutých niekoľko variantov aglutinačnej reakcie, ktoré sa líšia metodologickým vykonaním a účelom štúdie.

2. Ra na skle.

V tomto variante RA môžu byť testovanými subjektmi buď sérum alebo antigén, ale najčastejšie sa táto možnosť používa na identifikáciu mikroorganizmov.

1. Na identifikáciu mikroorganizmu (m/o) sa kvapka známeho aglutinačného séra, napríklad séra Salmonella, a kvapka fyziologického roztoku (kontrola) aplikujú oddelene na podložné sklíčko bez tuku. Potom sa pomocou bakteriologickej slučky odoberie bakteriálna hmota študovanej kultúry z kolónie v Petriho miske alebo z povrchu šikmej MPA v skúmavke a oddelene sa suspenduje v imunitnom sére a fyziologickom roztoku, kým sa nezíska homogénna suspenzia. . Výsledok sa berie do úvahy po 2...4 minútach.

Účtovanie výsledkov: v kontrolnej vzorke by nemali byť žiadne zmeny. Ak sa bakteriálna kultúra špecificky zhoduje s imunitným sérom, objavia sa aglutinačné vločky (pozitívny výsledok); ak nedôjde k aglutinačnému javu, usúdi sa, že skúmaná bakteriálna kultúra nezodpovedá imunitnému séru.

2. Uvažujme o detekcii anittelov v testovacom krvnom sére na príklade testu bengálskej ruže používaného pri sérodiagnostike brucelózy. Na podložné sklíčko sa nanesie 0,3 ml krvného séra testovaného zvieraťa a 0,03 ml brucelózneho antigénu (buniek brucelózy zafarbené ružovou a bengálskou farbou). Zložky sa dôkladne premiešajú pretrepaním pohára a výsledok sa berie do úvahy po 4 minútach.

Zaznamenávanie výsledkov: ak je reakcia pozitívna, objavia sa ružové vločky aglutinátu. Sérologická reakcia tohto typu je klasifikovaná ako kvalitatívna, pretože sa môže použiť na detekciu protilátok proti patogénu v krvnom sére zvieraťa, ale nie je možné posúdiť ich kvantitatívny obsah.

Aglutinačná reakcia (z lat. aglutinácia- lepenie) - lepenie teliesok (baktérií, červených krviniek a pod.) protilátkami za prítomnosti elektrolytov.

Aglutinačná reakcia sa prejavuje vo forme vločiek alebo sedimentu pozostávajúceho z teliesok (napríklad baktérií) „zlepených“ protilátkami (obr. 7.37). Aglutinačná reakcia sa používa na: stanovenie patogénu izolovaného od pacienta; stanovenie protilátok v krvnom sére pacienta; stanovenie krvných skupín.

Ryža. 7,37 a, b. Aglutinačná reakcia sIgM-protilátky (a) aIgG- protilátky (b)

1. Stanovenie patogénu izolovaného od pacienta Približná aglutinačná reakcia na skle (obr. 7.38). Suspenzia baktérií izolovaných z pacienta sa pridá do kvapky aglutinačného séra (riedenie 1:20). Vytvorí sa vločkovitá zrazenina.

Ryža. 7.38.

Rozsiahla aglutinačná reakcia s patogénom izolovaným z pacienta (obr. 7.39). Suspenzia baktérií izolovaných z pacienta sa pridá k riedeniu aglutinačného séra.

Ryža. 52

2. Stanovenie protilátok v krvnom sére pacienta
Podrobná aglutinačná reakcia s krvným sérom pacienta (obr. 7.39). Diagnosticum sa pridáva do riedenia pacientovho séra.
- Aglutinácia s O-diagnosticum (baktérie usmrtené teplom, zadržiavajúce O-antigén) prebieha vo forme jemnozrnnej aglutinácie.
- Aglutinácia s H-diagnosticum (baktérie usmrtené formaldehydom, zadržiavajúce bičíkový H-antigén) je veľká a prebieha rýchlejšie.
3. Aglutinačná reakcia na stanovenie krvných skupín Aglutinačná reakcia na stanovenie krvných skupín sa používa na vytvorenie systému ABO (tab. b) pomocou aglutinácie erytrocytov s protilátkami imunitného séra proti antigénom krvných skupín A (I), B (III). Kontrolou je: sérum, ktoré neobsahuje protilátky, t.j. krvná skupina AB (IV) v sére; antigény obsiahnuté v červených krvinkách skupín A (II), B (III). Negatívna kontrola neobsahuje antigény, t.j. používajú sa erytrocyty skupiny O (I).

Tabuľka 7.6. Stanovenie krvných skupín ABO

Výsledky reakcie		Skupina
		prináležať
		skúmané krvi
červených krviniek s	sérum (plazma)
štandardná	so štandardom
séra

Obsah témy "Imunomodulátory. Imunodiagnostika infekčných ochorení.":

Podrobná aglutinačná reakcia (RA). Na stanovenie AT v krvnom sére pacienta a rozsiahla aglutinačná reakcia (RA). K tomu sa do série riedení krvného séra pridáva diagnostikum – suspenzia usmrtených mikroorganizmov alebo častíc so sorbovaným Ag. Maximálne riedenie aglutinácia Ag sa nazýva sérový titer.

Typy aglutinačných reakcií (RA) na zistenie AT - kvapkový test na tularémiu (s diagnostikom aplikovaným na kvapku krvi a objavením sa viditeľných belavých aglutinátov) a Huddlesonov test na brucelózu (s diagnostikom zafarbeným genciánovou violeťou aplikovaným na kvapku krvi sérum).

Približná aglutinačná reakcia (RA)

Na identifikáciu izolovaných mikroorganizmov sa na podložné sklíčka umiestni približná RA. Na tento účel sa ku kvapke štandardného diagnostického antiséra (riedeného 1:10, 1:20) pridá kultúra patogénu. O pozitívny výsledok vykonajte podrobnú reakciu so zvyšujúcimi sa riedeniami antiséra.

Reakcia za pozitívne, ak sa aglutinácia pozoruje v riedeniach blízkych titru diagnostického séra.

OAS. Somatické O-Ags sú tepelne stabilné a vydržia var 2 hodiny.Pri interakcii s AT tvoria jemnozrnné agregáty.

N-Ag. N-Ag (bičíkaté) sú termolabilné a rýchlo sa rozkladajú pri 100 °C, ako aj vplyvom etanolu. Pri reakciách s H-antisérom sa po 2 hodinách inkubácie vytvoria voľné veľké vločky (vytvorené baktériami, ktoré sa zlepia s bičíkmi).

Vi-Ar baktérie týfusu sú relatívne tepelne stabilné (odoláva teplotám 60-62 °C počas 2 hodín); Pri inkubácii s Vi antisérom sa vytvorí jemnozrnný aglutinát.

Priame hemaglutinačné reakcie

Najjednoduchšie z nich reakcie - aglutináciačervených krviniek alebo hemaglutinácia, ktorá sa používa na stanovenie krvných skupín v systéme ABO. Na určenie aglutinácia(alebo ich nedostatok) použiť štandardné antiséra s anti-A a anti-B aglutinínmi. Reakcia sa nazýva priama, pretože skúmané Ag sú prirodzené zložky červených krviniek.

Spoločné s priama hemaglutinácia vírusová hemaglutinácia má mechanizmy. Mnohé vírusy sú schopné spontánne aglutinovať erytrocyty vtákov a cicavcov, ich pridanie do suspenzie erytrocytov spôsobuje tvorbu zhlukov z nich.

Aglutinácia je zlepenie a precipitácia mikróbov alebo iných buniek pod vplyvom protilátok v prítomnosti elektrolytu (izotonický roztok chloridu sodného). Skupiny zlepených baktérií (bunky) sa nazývajú aglutináty. Na aglutináciu sú potrebné tieto zložky:

1. Protilátky (aglutiníny), ktoré sa nachádzajú v sére chorého alebo imúnneho zvieraťa.

2. Antigén – suspenzia živých alebo usmrtených mikróbov, červených krviniek alebo iných buniek.

3. Izotonický (0,9 %) roztok chloridu sodného.

Aglutinačná reakcia na sérodiagnostiku sa používa pri brušnom týfuse a paratýfuse (Vidalova reakcia), brucelóze (Wrightova a Heddlesonova reakcia), tularémii atď. Protilátkou je sérum pacienta a antigén je známy mikrób. Pri identifikácii mikróbov alebo iných buniek sa ich suspenzia používa ako antigén a ako protilátka sa používa známe imunitné sérum. Táto reakcia sa široko používa na diagnostiku črevné infekcie, čierny kašeľ a pod.

Metódy stagingu RA

Približná RA na skle

Nasadený RA

(metóda objemu)

Koaglutinačná reakcia

Rozvinutá RA na skle (séroidentifikácia)

Aglutinačná reakcia na skle. Dve kvapky špecifického (adsorbovaného) séra a kvapka izotonického roztoku chloridu sodného sa aplikujú na podložné sklíčko bez tuku. Neadsorbované séra sú predriedené v pomere 1:5 - 1:100. Kvapky sa musia aplikovať na sklo tak, aby medzi nimi bola vzdialenosť. Kultúra sa dôkladne rozomelie na skle pomocou slučky alebo pipety a potom sa pridá ku kvapke izotonického roztoku chloridu sodného a jednej z kvapiek séra, pričom sa každá z nich mieša, kým sa nevytvorí homogénna suspenzia. Kvapka séra bez kultúry je kontrola séra.

Pozor! Kultúru zo séra nemôžete preniesť do kvapky izotonického roztoku chloridu sodného, ​​ktorý slúži ako kontrola antigénu. Reakcia prebieha pri teplote miestnosti počas 1-3 minút. Ak kontrola séra zostane priehľadná, v antigénovej kontrole sa pozoruje rovnomerný zákal a v kvapke, kde sa kultúra zmiešava so sérom na pozadí čírej tekutiny, sa objavia aglutinačné vločky, výsledok reakcie sa považuje za pozitívny.

Diagnostické fyziologické

sérum + kultivačný roztok + kultivácia

Podrobná aglutinačná reakcia (objemová metóda). Pripravujú sa sériové, najčastejšie dvojnásobné, riedenia séra. Metóda sa nazýva volumetrická. Na stanovenie titra protilátok v krvnom sére odoberte 6 skúmaviek. Do prvej skúmavky nalejte 1 ml pôvodného riedenia séra 1:50 a pomocou odmernej pipety pridajte 1 ml fyziologického roztoku do všetkých 6 skúmaviek. Prvá skúmavka poskytne riedenie séra 1:100 s objemom 2 ml. Preneste 1 ml z prvej skúmavky do druhej skúmavky, kde je riedenie 1:200. Preto urobte sériu sériových riedení séra v prvých 5 skúmavkách (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Z piatej skúmavky nalejte 1 ml do dezinfekčného roztoku. Pridajte 2 kvapky diagnostika do všetkých 6 skúmaviek. Šiesta skúmavka je kultivačná kontrola, pretože obsahuje iba fyziologický roztok a diagnostikum.

Ingrediencie	číslo trubice
						kontrola séra	ovládanie diagnostic-kuma
Fyziologické
Sérum pacienta
riedenie 1:50
Diagnostika (kvapky)
Riedenie séra

Takáto kontrola je potrebná na vylúčenie spontánnej aglutinácie kultúry. Skúmavky sa pretrepú a umiestnia sa do termostatu pri teplote 37 °C na 2 hodiny a potom sa nechajú jeden deň pri teplote miestnosti, po čom sa zaznamenajú výsledky aglutinačnej reakcie. Pri vykonávaní aglutinačnej reakcie so sérami detí v prvých mesiacoch života je z dôvodu funkčnej menejcennosti tvorby protilátok potrebné identifikovať nižšie titre protilátok, čo sa berie do úvahy pri riedení séra. Počiatočné riedenie séra je 1:25. V prvej skúmavke sa získa riedenie 1:50, potom 1:100 atď.

Ak je výsledok reakcie pozitívny, skúmavky ukazujú uviaznuté bunky vo forme zŕn alebo vločiek na pozadí čírej tekutiny. Aglutinát sa postupne usadzuje na dne vo forme „dáždnika“ a kvapalina nad sedimentom sa stáva čírou. Antigénna kontrola je rovnomerne zakalená.

Na základe charakteru sedimentu sa rozlišuje jemno- a hrubozrnná (vločková) aglutinácia. Pri práci s O-sérami sa dosiahne jemnozrnná aglutinácia. Hrubozrnné - keď pohyblivé mikróby interagujú s bičíkovými H-sérami. Vyskytuje sa rýchlejšie ako jemnozrnný a výsledný sediment je veľmi voľný a ľahko sa rozbije.

Intenzita reakcie je vyjadrená takto:

Všetky bunky sa usadili, kvapalina v skúmavke je úplne priehľadná. Výsledok reakcie je ostro pozitívny;

Sedimentov je menej, kvapalina sa úplne nevyčistí. Výsledok reakcie je pozitívny;

Sedimentov je ešte menej, kvapalina je zakalená. Výsledok reakcie je pochybný;

Na dne skúmavky je mierny sediment, kvapalina je zakalená. Pochybný výsledok reakcie;

Neexistuje žiadny sediment, kvapalina je rovnomerne zakalená, ako pri antigénovej kontrole. Výsledok negatívnej reakcie